Resumen:
El virus Zika es transmitido a humanos por mosquitos del género Aedes aegypti y, desde
su irrupción epidémica en el siglo XXI, representa un problema sanitario complejo en
países tropicales. La proteína de envoltura E recubre la superficie viral y cumple un rol
clave tanto en el ciclo de replicación como en la respuesta inmunitaria. Esta
glicoproteína media la entrada viral por fusión de membranas y constituye el principal
antígeno reconocido por el sistema inmune, lo que la convierte en un blanco estratégico
para el diseño de tratamientos y métodos diagnósticos. En la partícula viral, E se
organiza en 180 copias dispuestas como dímeros en simetría icosaédrica. Sin embargo,
aislar esta conformación resulta desafiante debido a su tendencia a adoptar estados
monoméricos o triméricos con distinta morfología y estabilidad. En este trabajo se
diseña una variante estabilizada de E mediante mutagénesis sitio-dirigida in silico,
incorporando pares de cisteínas orientados a formar puentes disulfuro en la interfase
dimérica. Los modelos generados se validan estructuralmente mediante inteligencia
artificial (AlphaFold3) y alineamientos tridimensionales. Las secuencias optimizadas se
sintetizan y clonan en plásmidos de expresión pET21a(+), y se transforman en cepas
competentes de E. coli preparadas en el laboratorio. Se evalúan diferentes condiciones
experimentales, incluyendo dos cepas de expresión (E. coli BL21 y C41), dos medios de
cultivo (LB y 2YT) y regímenes de inducción variables. El sistema más eficiente resulta
ser la cepa C41(DE3) en medio 2YT con inducción a 37 °C, que permite una expresión
robusta de la proteína. Asimismo, se implementa un protocolo de purificación con
replegado oxidativo, logrando establecer un esquema de producción de bajo costo para
una proteína estructuralmente compleja. En conjunto, este trabajo desarrolla y optimiza
una plataforma bacteriana económica y escalable para la producción de proteínas de
interés biomédico con estructuras cuaternarias estabilizadas, con potencial aplicación en
estudios estructurales y en el desarrollo de candidatos vacunales.
