Desarrollo y validación de herramientas moleculares y celulares para ensayos de complementación funcional en trypanosoma cruzi mutantes por deleción de TSSA

Abstract

El presente trabajo propone como objetivo la generación de las herramientas moleculares necesarias para obtener líneas derivadas de los clones modificados, los cuales poseen expresión constitutiva de la nucleasa Cas9, complementadas con TSSA. Para agregar valor a nuestro trabajo, nos planteamos la complementación de estas líneas con tres isoformas distintas de esta proteína llamadas TSSAI, TSSAII y TSSAIII. Mediante la incorporación mutaciones y etiquetas antigénicas, se realizó un diseño racional de los genes sintéticos correspondientes a cada una de las isoformas de TSSA. Utilizando técnicas de biología molecular clonamos estos constructos en vectores apropiados, los cuales fueron luego transfectados en formas epimastigotes de las diferentes líneas de parásitos. Distintas evaluaciones inmunoquímicas indicaron que nuestro diseño permitió la correcta expresión y presentación de las proteínas TSSA en la superficie del parásito. Sin embargo, algunas isoformas mostraron patrones electroforéticos diferentes al de la proteína endógena, lo cual ya había sido reportado previamente, y que posiblemente este asociado a un procesamiento diferencial entre estadios del desarrollo del parásito